T P Nº 12: Separación de pigmentos fotosintéticos

Objetivos del práctico.

Separar e identificar la presencia de pigmentos en las hojas de vegetales por separación simple y por 

cromatografía sobre papel.

Identificar las fases de una cromatografía.

Advertencias sobre los riesgos asociados a las tareas.

Manejar los equipos cuidadosamente. Extremar los cuidados al manejar solventes orgánicos Seguir todas las indicaciones establecidas en el REGLAMENTO DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO. 

Experiencia Nº 1: Extracción de pigmentos y separación simple.

1. Colocar en un mortero tres hojas del vegetal elegido, divididas en trozos.
2. Agregar 20 mL de alcohol etílico y triturar con el pilón hasta que el solvente adquiera un color verde intenso.
3. Preparar el embudo con papel de filtro sobre el tubo de ensayo.
4. Filtrar la fase líquida contenida en el mortero.
5. Colocar parte del filtrado en un tubo de ensayo y  agregar tetracloruro de carbono (Con ayuda del profesor).
6. Agitar por unos segundos y dejar reposar en una gradilla por 10 minutos.
7. Los pigmentos se irán separando según su adsorción o afinidad con los solventes.
8. Dibujar y escribir que solvente y que pigmentos hay en cada fase. Colorear.
9. Transcribir los pictogramas o advertencias de las etiquetas de los solventes.

Experiencia Nº 2: Extracción de pigmentos y separación por cromatografía en papel.

1. Colocar en un mortero tres hojas del vegetal elegido, divididas en trozos.
2. Agregar 20 mL de acetona y triturar con el pilón hasta que el solvente adquiera un color verde intenso.
3. Preparar el embudo con papel de filtro sobre el tubo de ensayo.
4. Filtrar la fase líquida contenida en el mortero.
5. Agregar al líquido filtrado unos cristales de Cl₂Ca. Observar la formación de un sedimento acuoso, sobre el cual sobrenada una solución de acetona conteniendo los pigmentos. Dibujar y colorear el tubo con las soluciones.
6. Preparar la fase fija o de sostén para realizar la separación de los pigmentos, con un tubo de papel para cromatografía cuyo diámetro sea igual al diámetro de la boca del frasco y cuya altura sea igual a la del frasco.
7. Trazar en el papel una línea suave con lápiz, a 2,5 cm por encima de la base del cilindro.
8. Con la pipeta y propipeta, tomar la solución de acetona, cuidado de no tomar la parte acuosa.
9. Pasar la pipeta por la línea marcada, de modo de impregnar el papel con la solución. Repetir tres veces.
10.  Con ayuda del profesor; verter éter de petróleo (fase móvil) en el frasco hasta la altura de 1 cm.
11.  Colocar dentro del frasco el papel de filtro arrollado, sin tocar el éter de petróleo.
12.  Dejar en reposo 10 minutos.
13.  Observar, dibujar, colorear e identificar los pigmentos.
14. Transcribir los pictogramas o advertencias de las etiquetas de los solventes.

FIRMA DEL ALUMNO: